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核酸扩增新方法Cas9nAR

来源: 发布日期:2019-03-29

无论是用DNA证据揭露犯罪者,或者对古生物学发现进行分类,亦或者鉴定父子关系,核酸的扩增都是必不可少的环节。2019年2月18日Angewandte Chemie报道,中国华东理工大学的研究者开发了一种新的核酸扩增方法——cas9n放大反应(Cas9n-based amplification reaction,Cas9nAR),该方法只需要用一个试剂在均相溶液中于37℃恒温下反应,简单易行且结果可靠。较之于传统的聚合酶链反应(PCR),该方法避免了加热和冷却步骤,不需要复杂而精确的仪器,使用的试剂可以被冷冻干燥,因此可以在实验室之外使用。 
  研究者修改了Cas9基因剪刀,使其只切断DNA的一条链,引入一个缺口。这种酶被称为“切口酶(nickase)”。其他与细菌系统一样,Cas9切口酶与引导RNA链结合,引导RNA链决定了切口的位置。在这项新技术中,研究人员制造了两种不同的Cas9切口酶RNA复合物,它们在两个不同的地方切割DNA。聚合酶(PCR常用)被用于从第一个缺口开始分离DNA双链,直到到达第二个缺口。新合成的DNA被反复切割。这个过程释放的短单链成为第二个循环中进一步放大的模板。除了切口酶复合物和聚合酶,还需要两个合适的引物作为复制的起点。 
  利用细菌基因组DNA片段进行测试,目标序列被精确的识别和扩增。只需要20μl体积,就可以实现基因检测,基因表达的差异也可以被高特异性地检测出来。 
  吴晓燕 编译自https://www.sciencedaily.com/releases/2019/03/190312123632.htm 
  原文链接:http://dx.doi.org/10.1002/anie.201901292 
  原文标题:An RNA-Guided Cas9 Nickase-Based Method for Universal Isothermal DNA Amplification 

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